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[硕士论文] [硕士论文]PCV2、PPV、PRV、PRRSV和CSFV复合PCR检测技术的建立和初步应用

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发表于 2011-8-24 05:04:48 | 显示全部楼层 |阅读模式
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适用专业:预防兽医学
适用年级:大学
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论文编号:197802
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论文简介:
硕士论文-PCV2、PPV、PRV、PRRSV和CSFV复合PCR检测技术的建立和初步应用,共75页,37375字
摘 要
猪繁殖障碍病在国内外都有严重发生,已成为大中型猪场最重要的疫病之一,并且
呈全球性分布。我国当前以猪圆环病毒 2 型感染、猪细小病毒病、猪伪狂犬病、猪繁殖
与呼吸综合征、猪瘟造成的猪繁殖障碍最为普遍和严重,特别是这几种病原常混合感染,
可以引起 70% 以上的初产母猪发生流产、产死胎、弱仔,给养猪业造成巨大的经济损
失。
本研究针对猪圆环病毒 2 型 (PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)5 种病原,建立复合 PCR 检
测技术,并用该法对山东省胶东地区的猪场进行检测,从而了解该地区猪繁殖障碍病的
发病情况,为猪场制定合理的免疫程序提供参考。
根据 Genbank 上 PCV2、PPV、PRV、PRRSV 和 CSFV 的已知序列,分别设计并合
成了 5 对特异性扩增引物,建立 PCV2、PPV、PRV、PRRSV 和 CSFV 单项 PCR 检测方
法,分别扩增出预期的 466 bp、759 bp、349 bp、202 bp 和 707bp 片段。对单项 PCR 反
应条件(引物浓度、dNTP 浓度、TaqDNA 聚合酶浓度、退火温度和 PCR 反应程序)进
行优化,筛选出最佳反应条件。
在优化单项 PCR 反应条件基础上,建立了 PCV2-PPV-PRV-PRRSV-CSFV 复合 PCR
检测方法,并对其特异性、敏感性和重复性进行了测定。结果表明:只有特异性引物与
其特异性模板能扩增出预期大小的条带,与其它模板没有任何扩增产物,表明该法特异
性好;最低能检测到 184pg/L 的 PCV2、248pg/L 的 PPV、5.3ng/L 的 PRV、25.6ng/L 的
PRRSV、15.28ng/L 的 CSFV 的核酸模板,表明该法具有较高的敏感性;重复检测 3 次,
其结果均一致,表明重复性好。
采用建立的 PCV2-PPV-PRV-PRRSV-CSFV 复合 PCR 检测方法,对山东省胶东地区
送检的 32 份临床疑似病料进行了 PCR 检测,结果表明:32 份样品中,PCV2、PPV、
PRV、PRRSV 和 CSFV 感染的阳性率分别为 25.00%、0%、34.38%、71.88%和 3.13%;
共检出 25 份阳性病料,阳性率为 78.13%,其中 PRV-PRRSV 双重感染的比例为 31.25%,
PCV2-PRV-PRRSV 三种病原体混合感染的比例为 25.00%。用单项 PCR 检测作对照,结
果两者符合率为 100%,表明该复合 PCR 检测方法具有较高的敏感性,可以进行临床猪
圆环病毒 2 型感染、猪细小病毒病、猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟的病原学
快速诊断。
关键词:猪圆环病毒 2 型;猪细小病毒;猪伪狂犬病毒;猪繁殖与呼吸综合征病毒;
猪瘟病毒;复合 PCR
目录
摘要…………………Ⅰ
英文摘要……………Ⅲ
缩略词表……………Ⅴ
文献综述……………1
试验部分……………14
前言…………………14
试验一 PCV2、PPV、PRV、PRRSV和 CSFV 单项 PCR 检测方法的建立… … … … … … … … … … … 17
1 材料与方法 ……17
2 结果与分析 ……25
3 讨论 ……………31
试验二 PCV2、PPV、PRV、PRRSV 和 CSFV 复合 PCR 检测方法的建立…34
1 材料与方法 ……34
2 结果与分析 ……35
3 讨论 ……………40
试验三 复合 PCR 检测技术的初步应用………41
1 材料与方法 ……41
2 结果与分析 ……42
3 讨论 ……………44
结论…………………46
参考文献……………47
附录…………………51
致谢…………………64


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  • 硕士论文-PCV2、PPV、PRV、PRRSV和CSFV复合PCR检测技术的建立和初步应用
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发表于 2011-9-24 07:37:56 | 显示全部楼层
我啊    真是无语了
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发表于 2013-4-6 08:33:21 | 显示全部楼层
怎么没人说?
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发表于 2013-4-8 14:28:33 | 显示全部楼层
好东西呀,正是偶想要,非常感谢楼主啊
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发表于 2013-4-8 18:26:58 | 显示全部楼层

11~~顶

楼主你真是 太 有 才了
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发表于 2013-4-9 14:20:49 | 显示全部楼层
好,顶下
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发表于 2013-4-11 12:53:02 | 显示全部楼层

zzzzz

aaaaaaaa  3Q
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发表于 2013-4-12 13:08:28 | 显示全部楼层
好东西 支持楼主了 ~~~
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发表于 2013-4-15 20:01:29 | 显示全部楼层
谁知道怎么加积分快呀
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发表于 2013-4-16 16:41:45 | 显示全部楼层

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