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[硕士论文] [硕士论文]热应激对体外小鼠早期囊胚发育能力及超微结构影响的研究

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发表于 2011-8-22 18:25:30 | 显示全部楼层 |阅读模式
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文件大小:3.85MB
适用专业:预防兽医学
适用年级:大学
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论文编号:197824
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论文简介:
硕士论文-热应激对体外小鼠早期囊胚发育能力及超微结构影响的研究,共65页,32274字
摘 要
以雌性昆明种小鼠为试验动物,经 PMSG-hCG 超数排卵后,收集受精卵,进行体
外培养。当胚胎发育至早期囊胚时,按照下列方式处理:(1)将体外培养至早期囊胚的
小鼠胚胎分别施以温和热应激(39℃,2h)和强烈热应激处理(41℃,2h),热应激结
束后在 37℃下继续培养;对照组在 37℃下连续培养。在体视显微镜下观察热应激后 24h
时早期囊胚发育到扩张囊胚的比率和热应激后 48h 时早期囊胚发育到孵化囊胚的比率;
利用早期胚胎总细胞计数法,统计热应激后 24h 时早期囊胚发育到扩张囊胚的平均总细
胞数及热应激后 48h 时早期囊胚发育到孵化囊胚的平均总细胞数。 2)将体外培养至早
期囊胚的小鼠胚胎分别施以温和热应激(39℃,2h)和强烈热应激(41℃,2h)处理,
分别在热应激后 0h 和 2h 时,收集胚胎,制作超薄切片;对照组胚胎处理方式同热应激
组。利用电子显微镜技术,观察不同强度热应激组和对照组胚胎及热应激后胚胎不经恢
复和恢复 2h 时的超微结构变化。试验结果如下:
1. 热应激对小鼠早期囊胚发育能力的影响
体外培养的小鼠早期囊胚在 41℃、6%CO2条件下热应激处理 2h,小鼠早期囊胚发
育到扩张囊胚(63.3±3.6%)和孵化囊胚(49.4±9.3%)的比率显著降低(P<0.05),而
在 39℃、5.5%CO2条件下热应激处理 2h的小鼠早期囊胚发育到扩张囊胚(80.8±6.4%)
和孵化囊胚(79.7±5.6%)的比率与对照组小鼠早期囊胚发育到扩张囊胚(81.7±6.5%)
和孵化囊胚(77.2±5.0%)的比率差异不显著(P>0.05)。与对照组小鼠早期囊胚发育到
扩张囊胚的平均总细胞数(57.11±1.7)相比,39℃热应激组(49.89±1.3)和 41℃热应
激组(42.22±2.0)小鼠早期囊胚发育到扩张囊胚的平均总细胞数均显著降低(P<0.05),
但 39℃热应激组(71.27±0.5)和 41℃热应激组(71.89±1.8)小鼠早期囊胚发育到孵化
囊胚的平均总细胞数与对照组(73.09±0.6)小鼠早期囊胚发育到孵化囊胚的平均总细胞
数之间差异不显著(P>0.05)。
2. 热应激对小鼠早期囊胚超微结构形态的影响
在 37℃正常培养的小鼠早期囊胚中,胞浆含有丰富的线粒体和内质网及少量的溶
酶体;粗面内质网上有大量的颗粒状的核糖体附着;细胞核内以常染色质为主,核仁大
而松散;细胞连接紧密、结构完整;卵周隙狭窄。
39℃热应激组小鼠早期囊胚的线粒体发生轻微肿胀,内质网略有扩张,部分核糖体
从粗面内质网上脱落;核周间隙稍有增大。经 37℃恢复培养 2h,上述异常细胞器已修
复。
41℃热应激组小鼠早期囊胚线粒体高度肿胀,粗面内质网上的核糖体脱落严重,滑
面内质网和溶酶体增多;卵周间隙和核周间隙明显增大;核仁的纤维部和颗粒部分离,
异染色质增多;桥粒连接结构被破坏,胞浆出现异常物质。热应激后经 37℃恢复培养
2h,损伤的细胞器没有得到修复。
以上结果说明,39℃温和热应激 2h 未对小鼠早期囊胚的发育能力和细胞器超微结
构形态产生明显的影响。41℃强烈热应激 2h 对小鼠早期囊胚发育具有明显的抑制作用,
并且损伤的胚胎难以从热应激中恢复。
关键词:热应激;小鼠;早期囊胚;发育能力;超微结构
目录
中文摘要 ......... 1
英文摘要 ......... 3
缩略符号 ....... Ⅰ
文献综述 ......... 1
1 前言 ............. 1
2 热应激对哺乳动物卵母细胞及早期胚胎发育能力的影响 ............... 1
2.1 热应激对卵母细胞成熟及受精过程的影响 1
2.2 热应激对附植前胚胎发育能力的影响 ........ 2
3 热应激抑制哺乳动物早期胚胎发育的作用机理 ............. 4
3.1 诱导氧化应激 ............ 4
3.2 促使细胞凋亡 ............ 4
3.3 阻碍有丝分裂 ............ 5
4 热休克蛋白 70 对细胞的保护作用 ................. 6
4.1 分子伴侣功能 ............ 7
4.2 诱导热耐受性 ............ 7
4.3 抑制细胞凋亡 ............ 7
4.4 抵抗氧化应激 ............ 8
4.5 参与细胞增殖 ............ 8
5 热应激对哺乳动物细胞器结构和功能的影响 ................. 8
5.1 热应激对细胞骨架的影响 .......... 9
5.2 热应激对线粒体的影响 .............. 9
5.3 热应激对细胞核的影响 ............ 10
5.4 热应激对核糖体、内质网、溶酶体及高尔基复合体的影响 ...... 10
试验一 热应激对小鼠早期囊胚发育能力的影响 ............. 12
1 试验材料 ... 12
1.1 试验动物 12
1.2 试验药品 12
1.3 试验器材 12
2 试验方法 ... 12
2.1 小鼠早期囊胚体外培养 ............ 13
2.2 胚胎细胞计数溶液配制 ............ 13
2.3 热应激处理 .............. 14
2.4 热应激后小鼠早期囊胚发育到扩张囊胚和孵化囊胚的比率 ...... 14
2.5 热应激后小鼠早期囊胚发育到扩张囊胚和孵化囊胚总细胞数 .. 14
2.6 数据统计 14
3 结果 ........... 14
3.1 热应激对小鼠早期囊胚发育到扩张囊胚和孵化囊胚比率的影响 ................ 14
3.2 热应激对小鼠早期囊胚发育到扩张囊胚和孵化囊胚总细胞数的影响 ........ 15
4 讨论 ........... 16
试验二 热应激对小鼠早期囊胚超微结构的影响 ............. 18
1 试验材料 ... 18
1.1 试验动物 18
1.2 试验药品 18
1.3 试验器材 18
2 试验方法 ... 18
2.1 小鼠早期囊胚体外培养 ............ 19
2.2 热应激处理 .............. 19
2.3 胚胎超薄切片药品配制 ............ 19
2.4 胚胎超薄切片制作 .. 20
2.5 图片处理 21
3 结果 ........... 21
3.1 热应激对小鼠早期囊胚线粒体的影响 ...... 21
3.2 热应激对小鼠早期囊胚溶酶体的影响 ...... 23
3.3 热应激对小鼠早期囊胚内质网的影响 ...... 25
3.4 热应激对小鼠早期囊胚细胞核的影响 ...... 26
3.5 热应激对小鼠早期囊胚细胞连接和卵周隙的影响 .... 28
3.6 热应激导致小鼠早期囊胚胞质产生异常物质 ............ 30
4 讨论 ........... 31
结论 ............... 34
参考文献 ....... 35
致谢 ............... 45
附录 ............... 46


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发表于 2011-10-8 17:14:25 | 显示全部楼层
这个系列的帖子都不错
要顶!
谢谢楼主分享!
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发表于 2013-4-5 12:16:47 | 显示全部楼层

好啊
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发表于 2013-4-5 17:31:28 | 显示全部楼层
不错
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发表于 2013-4-11 17:36:39 | 显示全部楼层
看看啊
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发表于 2013-4-14 09:13:50 | 显示全部楼层

GOOD

好东西啊~
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发表于 2013-4-16 18:30:07 | 显示全部楼层
看看,给钱么。。。。
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发表于 2013-4-19 11:06:41 | 显示全部楼层
好东西我要,没有积分啊

点评

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